摘 要：为研究水解单宁酸对蛋鸡肠道pH值、酶活和菌群的影响。选取30周龄海兰灰蛋鸡4000只，随机分为5组，每组4个重复，每个重复200只。对照组饲喂基础日粮，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别添加0.05%、0.10%、0.15%和0.20%的水解单宁酸，试验期4周。结果表明，试验Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组可显著降低蛋鸡十二指肠和空肠内容物的pH值（P<0.05）。在肠道酶活方面，与对照组相比，试验Ⅱ组对十二指肠和空肠的脂肪酶活性有显著影响（P<0.05）；试验Ⅱ组对十二指肠和空肠淀粉酶活性有显著影响（P<0.05），试验Ⅲ组对回肠的淀粉酶活性有显著影响（P<0.05）；试验Ⅰ组对十二指肠的蛋白酶活性有显著的影响（P<0.05），试验Ⅱ和Ⅲ组对十二指肠、空肠和回肠蛋白酶活性有显著影响（P<0.05）。在肠道微生物方面，可以使盲肠内有益菌增殖，抑制有害菌的生长，其中试验Ⅱ和Ⅲ组差异显著（P<0.05）。研究表明，蛋鸡日粮中加入适量的水解单宁酸（1
kg/t）可以有效地降低肠道pH值和提高肠道消化酶活性，增殖有益菌并抑制有害菌，从而达到改善肠道健康的作用。
关键词：水解单宁酸；蛋鸡；肠道pH值；肠道酶活；肠道菌群
作者：李 茜，侯海锋，刘彦慈，郑长山
单宁酸是一种分子量为500~3 000的能沉淀蛋白质、生物碱的多酚化合物，易溶于水、乙醇、丙酮和甘油等，微有特殊气味，具强烈的涩味（朱子洁，2013）。单宁酸根据化学结构可分为水解单宁酸和缩合单宁酸两种，缩合单宁酸具有较强的抗营养吸收作用，被认为是饲料中的抗营养因子，水解单宁酸除了具有促进伤口愈合、收敛和消毒作用外，还具有抗炎、抗氧化及促进吸收和促进生长作用（雷剑等，2007；邓奇风等，2015）。本研究通过研究水解单宁酸对蛋鸡肠道pH值、酶活性和菌群的影响，以探讨其对蛋鸡肠道健康的影响，并确定其在蛋鸡日粮中的最佳添加量，为水解单宁酸在蛋鸡生产中的应用提供理论依据，对拓宽饲料添加剂种类具有理论和实践意义。
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验用水解单宁酸，纯度≥75.00%，广东施华特贸易有限公司生产。
1.2 试验动物和分组
试验分组完全随机，抽取4 000只30周龄海兰灰蛋鸡，分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组，每组4个重复，每个重复200只鸡。
1.3 试验日粮
基础日粮为玉米-豆粕型日粮，试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别添加0.05%、0.10%、0.15%和 0.20%的水解单宁酸，日粮组成及营养水平见表1。
1.4 饲养管理
采用阶梯式笼养，采用人工光照和自然光照相结合（每天光照16 h），纵向机械通风和自然通风相结合，保持自由采食和自由饮水。预饲期1周，试验期为4周。
1.5 样品采集和指标测定
1.5.1 试验样品采集
试验结束后，每重复随机选2只蛋鸡进行屠宰，无菌操作收集十二指肠、空肠、回肠和盲肠的内容物，-80 ℃液氮中保存。
1.5.2 肠道pH值测定
用pHS-3B精密度 pH 计测定十二指肠和空肠内容物的 pH值。
1.5.3 肠道酶活性测定
脂肪酶、淀粉酶和蛋白酶活性使用南京建成生物工程研究所试剂盒，总蛋白酶活性参照周景祥等（2011）方法。
1.5.4 肠道菌群测定
大肠杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌数量以每克盲肠内容物所含的细菌数计算（以lg
cfu/g表示）（陈天寿，1995）。每克盲肠内容物细菌量=lg(菌落数×稀释倍数×每次稀释取样毫升数)/ （接种用样品毫升数×样品克数)。
1.6 数据分析与处理
采用SPSS软件进行单因子方差分析，数据以“平均数±标准差”表示。
2 结果与分析
2.1 水解单宁酸对蛋鸡肠道内容物pH值的影响
由表2可知，试验Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组十二指肠和空肠内容物的pH值显著低于对照组（P<0.05），试验Ⅰ组则与对照组相比无显著差异。
2.2 水解单宁酸对蛋鸡肠道内脂肪酶、淀粉酶和蛋白酶活性的影响
由表3可知，与对照组相比，在饲料中添加适量水解单宁酸，可以提高十二指肠和空肠的脂肪酶活性，试验Ⅱ组影响显著（P<0.05）；对回肠脂肪酶活性没有规律性影响。
由表4可知，与对照组相比，在饲料中添加适量水解单宁酸，可以提高十二指肠、空肠和回肠淀粉酶活性，Ⅱ组十二指肠、空肠影响显著（P<0.05），回肠酶活性影响差异不显著（P>0.05）。
由表5可知，与对照组相比，在饲料中添加适量水解单宁酸，对十二指肠蛋白酶活性有提高趋势，其中Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组效果显著（P<0.05）；同时提高空肠和回肠蛋白酶活性，其中Ⅱ和Ⅲ组效果显著（P<0.05）。
2.3 水解单宁酸对蛋鸡肠道菌群的影响
由表6可知，与对照组相比，水解单宁酸对蛋鸡盲肠各种微生物都是有影响的，其中Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组的大肠杆菌与对照组相比影响显著（P<0.05），Ⅱ和Ⅲ组的乳酸杆菌和双歧杆菌与对照组相比影响显著（P<0.05）。
3 讨论
3.1 饲粮中添加水解单宁酸对蛋鸡肠道内容物pH值的影响
家禽消化道的消化液主要由腺胃分泌 HCl 以及胆汁和胰液组成（杨宁，2012），其对肠道的 pH值、肠道菌群的数量及消化酶活性都有重要作用（樊红平等，2013）。饲粮中添加水解单宁酸时，由于水解单宁酸呈弱酸性，使胃中和消化道内的pH 值降低。在本试验中，0.10%、0.15%和 0.20%水解单宁酸添加组的十二指肠和空肠pH值显著低于对照组。
3.2 饲粮中添加水解单宁酸对蛋鸡肠道内脂肪酶、淀粉酶和蛋白酶活性的影响
刘华伟（2010）研究表明，饲粮中添加单宁酸可以显著提高肉兔十二指肠、空肠和回肠中α-淀粉酶的活性，同时也可以提高十二指肠和空肠中胰蛋白酶的活性。陈宝江等（2012）研究发现，在肉鸡日粮中添加单宁酸，可显著提高肉仔鸡肠道内淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性，这与本试验研究结果一致。表明水解单宁酸可以在一定程度上提高蛋鸡肠道内的消化酶活性水平。
3.3 饲粮中添加水解单宁酸对蛋鸡肠道菌群的影响
研究结果表明，水解单宁酸能够促进肠道有益菌的生长和增殖，显著增加肠道乳酸菌和双歧杆菌的数量；同时间接抑制有害菌的增殖，减少大肠杆菌的数量。这与本研究结果一致，本试验在饲粮中添加水解单宁酸，显著增加了乳酸杆菌和双歧杆菌在肠道内的增殖，有效抑制了大肠杆菌生长。这与单宁酸抑制有害微生物在动物肠道内的定植有关，水解单宁酸可以被有益菌利用，而有害菌几乎不能利用。许多有害菌的适宜的pH值为中性偏碱，因此降低消化道pH值可抑制有害菌的增殖（刘秀丽，2009）。双歧杆菌与肠黏膜上皮细胞的相互作用，在肠黏膜表面形成了一层具有屏障保护作用的生物膜，阻止有害菌的入侵，从而起到保护肠黏膜并改善肠道环境的作用（隋慧等，2013）。
4 结论
蛋鸡饲粮中添加水解单宁酸能有效地降低肠道pH值和提高肠道消化酶活性，增殖有益菌并抑制有害菌，从而达到改善肠道健康的作用。
参考文献
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